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本试剂盒是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。本试剂盒检测浓度下限达到5μg/mL，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。

1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
   
2. 加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。
   
3. 待测样品浓度在50～2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
   
4. BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
   
5. 操作时要带手套。

1. 标准曲线的绘制：
   
   1. 取一块酶标板，按照下表加入试剂
      

      孔号	0	1	2	3	4	5	6	7
      蛋白标准溶液(μL)	0	1	2	4	8	12	16	20
      去离子水(μL)	20	19	18	16	12	8	4	0
      对应蛋白含量(μg)	0	0.5	1.0	2.0	4.0	6.0	8.0	10.0

      
      
   2. 根据标准孔的数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀；
      
   3. 各孔加入200μL BCA工作液；
      
   4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
      
      1. 标准检测程序——37℃，30分钟(检测蛋白浓度范围0～500μg/mL)
         
      2. 室温检测程序——2小时(检测蛋白浓度范围10～2000μg/mL)
         
      3. 增强检测方案——60℃，30minutes (检测蛋白浓度范围5～250μg/mL)
2. 样品检测：
   
   5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；
      
   6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg)，除以样品稀释液总体积(20μL)，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位：μg/μL)。

1. 标准曲线的绘制：
   
   1. 各管按照下表加入试剂
      

      孔号	0	1	2	3	4	5	6	7
      蛋白标准溶液(μL)	0	5	10	20	40	60	80	100
      去离子水(μL)	100	95	90	80	60	40	20	0
      对应蛋白含量(μg)	0	2.5	5.0	10.0	20.0	30.0	40.0	50.0

      
      
   2. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀；
      
   3. 各管加入1000μL BCA工作液；
      
   4. 各管充分混匀，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
      
      1. 标准检测程序——37℃，30分钟(检测蛋白浓度范围20～2000μg/mL)
         
      2. 室温检测程序——2小时(检测蛋白浓度范围20～2000μg/mL)
         
      3. 增强检测方案——60℃，30minutes (检测蛋白浓度范围5～250μg/mL)
2. 样品检测：
   
   5. 稀释待测样品至合适浓度，样品稀释液总体积为100μL，加入BCA工作液1000μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；
      
   6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg)，除以样品稀释液总体积(100μL)，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位：μg/μL)。